1. Contesto dell'epidemia di dengue: una sfida globale per la salute pubblica in continua evoluzione.

La dengue è una malattia virale acuta trasmessa dalle zanzare, causata dal virus della dengue (DENV), che si è affermata come la malattia arbovirale a più rapida diffusione a livello globale, rappresentando una minaccia sostanziale per la sicurezza della salute pubblica. Negli ultimi due decenni, l'incidenza globale della dengue è aumentata drasticamente, con il numero di casi segnalati raddoppiato ogni anno dal 2021 [1]. Nel dicembre 2023, l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) ha dichiarato un'emergenza globale per la dengue al fine di rafforzare gli sforzi coordinati di risposta internazionale. Le stime epidemiologiche dell'OMS indicano che circa 3,9 miliardi di individui in tutto il mondo sono a rischio di infezione da dengue, con circa 390 milioni di infezioni che si verificano ogni anno, di cui 96 milioni si presentano come casi clinicamente evidenti [1,2].

2 Punti salienti epidemiologici

Le caratteristiche epidemiologiche della dengue sono determinate dall'interazione di fattori virologici, ecologia del vettore, risposte immunitarie dell'ospite e condizioni socio-ambientali. Una comprensione approfondita di queste caratteristiche è essenziale per lo sviluppo di strategie efficaci di prevenzione e controllo, nonché di approcci diagnostici accurati.

2.1 Vettori di trasmissione e modelli di trasmissione urbana

Il virus della dengue viene trasmesso principalmente tramiteAedes aegypti e Aedes albopictuszanzare. Tra queste specie vettrici, Aedes aegypti è riconosciuta come il vettore di trasmissione più critico, caratterizzato da un'elevata "adattabilità all'uomo" e da un'ampia distribuzione negli ambienti urbani tropicali e subtropicali. A differenza di altre zanzare vettrici di arbovirus, Aedes aegypti presenta le seguenti caratteristiche epidemiologiche chiave:

- Una preferenza per la riproduzione in ambienti antropizzati (ad esempio, contenitori per l'acqua, pneumatici abbandonati)

- Un forte tropismo per il sangue umano come fonte di nutrienti

-Comportamento alimentare diurno

Queste caratteristiche definiscono la dengue come una malattia tipica“malattie infettive urbane”con un'efficienza di trasmissione significativamente elevata nelle aree densamente popolate. Studi correlati all'OMS hanno dimostrato che negli ambienti urbani ad alta densità, l'aumento della frequenza del contatto zanzara-uomo può aumentare sostanzialmente il numero di riproduzione di base (R₀) del DENV, accelerando così la diffusione delle epidemie [2].

2.2 Tendenze di diffusione globale e fattori determinanti

Secondo i rapporti dell'OMS, il numero globale di casi di dengue segnalati è aumentato esponenzialmente negli ultimi due decenni [1,3]. Questa tendenza al rialzo è principalmente determinata dai seguenti fattori interconnessi:

(1) Cambiamento climatico: l'aumento delle temperature globali non solo espande la gamma geografica degli habitat adatti per i vettori di zanzare, ma accorcia anche il periodo di incubazione estrinseca del DENV all'interno dell'ospite zanzara, aumentando così l'efficienza della trasmissione. Le variazioni della densità di zanzare indotte dal clima sono state validate dall'OMS come un predittore affidabile delle dinamiche spazio-temporali delle epidemie di dengue.

(2) Urbanizzazione: la rapida e non pianificata espansione urbana ha creato abbondanti habitat riproduttivi per i vettori di zanzare, mentre l'aumento della densità di popolazione ha rafforzato la continuità delle catene di trasmissione del DENV.

(3) Movimenti globali della popolazione: i viaggi e il commercio internazionali hanno facilitato la rapida trasmissione transfrontaliera del DENV, promuovendo il passaggio dai casi importati alla trasmissione locale sostenuta. I dati di sorveglianza dell'OMS mostrano che tra il 2010 e il 2021, gli Stati Uniti hanno segnalato 7.528 casi di dengue associati ai viaggi, di cui 3.135 hanno richiesto il ricovero ospedaliero e 19 hanno causato il decesso.

(4) Espansione della distribuzione del vettore: a livello globale, l'areale geografico di Aedes aegypti e Aedes albopictus continua ad espandersi, con le zanzare Aedes che si insediano sempre più in alcune parti d'Europa. Di conseguenza, la dengue si è evoluta da un'epidemia tradizionalmente regionale a una minaccia globale per la salute pubblica.

2.3 Co-circolazione di sierotipi multipli e meccanismi di reinfezione

Il virus della dengue comprende quattro sierotipi antigenicamente distinti (DENV-1 a DENV-4). L'infezione con un sierotipo conferisce un'immunità protettiva a lungo termine contro quello specifico sierotipo, ma solo una protezione crociata temporanea e parziale contro gli altri tre sierotipi. La popolazione generale è universalmente suscettibile al DENV, con solo un sottoinsieme di individui infetti che sviluppa la malattia clinica [2].

Nelle regioni endemiche, spesso più sierotipi di DENV co-circolano simultaneamente, con la conseguente possibilità che gli individui contraggano infezioni multiple da dengue nel corso della loro vita. Gli studi epidemiologici dell'OMS hanno identificato la co-circolazione di più sierotipi come un fattore chiave delle epidemie periodiche di dengue [1].

2.4 Infezione secondaria e potenziamento dipendente dagli anticorpi

Un fenomeno critico e unico nell'epidemiologia della dengue èpotenziamento dipendente dagli anticorpi (ADE). Durante l'infezione secondaria con un sierotipo eterologo di DENV, gli anticorpi non neutralizzanti prodotti durante l'infezione primaria facilitano l'ingresso del virus nei monociti e nei macrofagi, potenziando così la replicazione virale. Questo meccanismo è ampiamente riconosciuto dall'OMS come un importante fattore patogeno nella dengue grave, comprese la febbre emorragica da dengue e la sindrome da shock da dengue [1].

I dati epidemiologici dell'OMS dimostrano costantemente che gli individui con infezione secondaria da dengue hanno un rischio significativamente più elevato di sviluppare una malattia grave rispetto a quelli con infezione primaria, una caratteristica di grande importanza per la sorveglianza della malattia e la gestione clinica. È importante notare che, sebbene il rischio di malattia grave sia elevato durante l'infezione secondaria, l'infezione con qualsiasi sierotipo di DENV può potenzialmente progredire verso la dengue grave [1].

2.5 Manifestazioni cliniche non specifiche e rischio di diagnosi errata

Le manifestazioni cliniche della dengue sono notevolmente aspecifiche, soprattutto nelle fasi iniziali della malattia, e spesso si sovrappongono a quelle di altre infezioni virali trasmesse dalle zanzare (ad esempio, i virus chikungunya e Zika) e a quelle di alcune infezioni respiratorie. Le stime dell'OMS indicano che il 40-80% delle infezioni da DENV sono asintomatiche [3].

Le manifestazioni cliniche tipiche includono:

- Febbre acuta (persistente per 2-7 giorni, eventualmente bifasica)

- Forte mal di testa e dolore retro-orbitale (dolore dietro gli occhi)

-Dolori muscolari e articolari (comunemente noti come "febbre spaccaossa")

-Eruzione maculare o maculopapulare

- Lievi manifestazioni emorragiche (ad es. ecchimosi, epistassi, sanguinamento gengivale)

La dengue sintomatica è tipicamente suddivisa in tre fasi distinte: la fase febbrile, la fase critica e la fase di recupero. Circa meno del 5% dei pazienti sintomatici progredisce verso la dengue grave. A causa della mancanza di caratteristiche cliniche specifiche, la diagnosi basata esclusivamente sui sintomi clinici è difficile, il che aumenta il rischio di diagnosi errata e sottodiagnosi. L'OMS sottolinea esplicitamente che la diagnosi clinica da sola non è sufficiente a garantire l'accuratezza, rendendo indispensabile la conferma di laboratorio [1].

 3 punti chiave tratti dalle "Linee guida provvisorie dell'OMS per i test di laboratorio per il virus della dengue, aprile 2025"

Nell'aprile 2025, l'Organizzazione Mondiale della Sanità ha pubblicato linee guida provvisorie aggiornate sui test di laboratorio per il virus DENV, fornendo indicazioni tecniche autorevoli per la diagnosi globale della dengue. Queste linee guida sintetizzano le più recenti evidenze scientifiche sui test di laboratorio per la dengue nel contesto dell'emergenza globale in corso e offrono raccomandazioni pratiche adattate a contesti con risorse diverse.

3.1 Principi fondamentali della strategia di test

Le linee guida sottolineano che la diagnosi di dengue deve adottare una strategia di test combinata multi-marker basata sullo stadio della malattia [1]. Data l'assenza di un algoritmo diagnostico universale, le strategie di test dovrebbero essere adattate ai contesti epidemiologici locali, tenendo conto dei seguenti fattori chiave [1]:

-Fase dell'infezione: il numero di giorni successivi alla comparsa dei sintomi determina il metodo di analisi più appropriato

-Tipo di campione: l'idoneità del sangue intero, del plasma o del siero per la rilevazione del virus DENV.

-Epidemiologia regionale: i sierotipi di DENV in circolazione a livello locale e la co-circolazione di altri arbovirus

-Rischio di coinfezione: nelle regioni con sovrapposizione della circolazione di arbovirus, si dovrebbe prendere in considerazione un test multiplex per distinguere tra diversi agenti patogeni.

3.2 Strategia di test basata sulle fasi

Secondo le linee guida dell'OMS, i test di laboratorio per la dengue dovrebbero seguire finestre temporali ben definite in base allo stadio della malattia [1,2]:

(1) Test in fase acuta (≤7 giorni dopo l'insorgenza)

- Test degli acidi nucleici (test molecolari): la reazione a catena della polimerasi con trascrittasi inversa (RT-PCR) e altri metodi molecolari rilevano l'RNA del DENV con elevata sensibilità.

- Test antigenico: rilevamento dell'antigene NS1, che diventa rilevabile entro 1-3 giorni dall'esordio dei sintomi.

Durante la fase acuta, i livelli di viremia sono relativamente elevati e i test per gli acidi nucleici e gli antigeni raggiungono una sensibilità ottimale.

(2) Test in fase di convalescenza (≥4 giorni dopo l'insorgenza)

- Test sierologici: gli anticorpi IgM diventano in genere rilevabili intorno al quarto giorno dall'esordio della malattia.

Nella maggior parte dei casi, gli anticorpi IgM persistono per 14-20 giorni e, in alcuni casi, la persistenza può estendersi fino a 90 giorni.

-Il test IgG ha un valore limitato per la diagnosi di dengue acuta a causa della potenziale reattività crociata degli anticorpi derivanti da precedenti infezioni da flavivirus o dalla vaccinazione.

(3) Algoritmo diagnostico del caso sospetto

Le linee guida includono un algoritmo diagnostico per i casi sospetti di dengue, che raccomanda i metodi di test appropriati in base ai giorni trascorsi dalla comparsa dei sintomi: il test dell'antigene NS1 e il test degli acidi nucleici sono gli approcci principali nella fase iniziale, mentre il test sierologico è il metodo principale nella fase successiva.

3.3 Valutazione delle prestazioni e selezione del metodo di prova

Secondo l'OMS, una valutazione sistematica delle prestazioni e degli scenari applicabili dei vari test per la dengue è la seguente:

4 Raccomandazioni sui prodotti per la rilevazione della dengue tramite macro e micro-test, in base allo scenario

Per supportare la prevenzione e il controllo della dengue, Macro & Micro-Test offre un portafoglio diagnostico integrato che comprende screening rapido, conferma molecolare e sorveglianza genomica, rispondendo alle esigenze nelle diverse fasi di gestione dell'epidemia.

4.1 Scenario 1: Screening rapido e sorveglianza mirata

Applicabile a cliniche per la febbre, strutture di assistenza sanitaria di base, screening comunitario in caso di focolai epidemici e quarantena portuale/di frontiera.

- Test rapido per l'antigene NS1 del virus Dengue: rileva l'infezione in fase iniziale (1-3 giorni dopo l'insorgenza dei sintomi) con risultati in 15 minuti per una rapida valutazione.

- Test degli anticorpi IgM/IgG contro il virus della dengue: permette di distinguere tra infezioni primarie e secondarie per valutare il rischio di malattia grave.

-Test rapido combinato per l'antigene NS1 del virus della dengue + IgM/IgG: rileva simultaneamente l'antigene e gli anticorpi per una diagnosi completa.

- Test degli anticorpi IgM/IgG per il virus Chikungunya: consente la diagnosi differenziale con la dengue per identificare con precisione gli agenti patogeni.

4.2 Scenario 2: Diagnosi di precisione e risposta alle emergenze

-Kit per la rilevazione degli acidi nucleici del virus Dengue I/II/III/IV: rileva e differenzia 4 sierotipi (limite di rilevazione 500 copie/mL) per il tracciamento dei focolai.

-Kit liofilizzato per PCR del virus della dengue: trasportabile a temperatura ambiente, adatto ad aree con risorse limitate e a focolai improvvisi.

-Kit PCR multiplex in tempo reale per Dengue/Zika/Chikungunya: rileva simultaneamente 3 arbovirus per una diagnosi differenziale efficace in caso di focolai complessi.

Tutti i reagenti sopra menzionati sono compatibili con il sistema completamente automatizzato AIO 800, che consente di ottenere risultati dal campione in modo rapido, riducendo le operazioni manuali e il rischio di contaminazione incrociata, e migliorando l'efficienza e la biosicurezza.

4.3 Scenario 3: Sorveglianza genomica e analisi del lignaggio virale

Applicabile ai laboratori di riferimento nazionali e agli istituti di ricerca sulla sanità pubblica, in linea con il posizionamento dell'OMS in materia di sequenziamento di nuova generazione (NGS).

Le soluzioni di sorveglianza genomica di Macro & Micro-Test supportano il sequenziamento dell'intero genoma per il tracciamento dei virus, la chiarificazione delle catene di trasmissione, il monitoraggio delle varianti e l'adeguamento delle strategie vaccinali. Supportano flussi di lavoro manuali e automatizzati, migliorando la produttività e la riproducibilità e consentendo ai laboratori di passare dai test di routine alla sorveglianza avanzata, in linea con l'enfasi posta dall'OMS sul rafforzamento del monitoraggio dell'evoluzione virale.

4.4 Valore delle soluzioni integrate

Macro & Micro-Test offre soluzioni diagnostiche complete per l'individuazione degli arbovirus, supportando ogni fase della gestione delle epidemie: strumenti di screening rapido per gli operatori sanitari in prima linea, conferma molecolare per una diagnosi di precisione e capacità di analisi del genoma completo per la sorveglianza epidemiologica. Grazie a test ad alte prestazioni, flussi di lavoro flessibili e piattaforme predisposte per l'automazione, queste soluzioni consentono a laboratori e sistemi sanitari pubblici di rafforzare la preparazione e la risposta alle minacce emergenti di arbovirus in tutto il mondo.

Riferimenti

[1] Organizzazione Mondiale della Sanità. Test di laboratorio per il virus della dengue: linee guida provvisorie, aprile 2025. Ginevra: Organizzazione Mondiale della Sanità; 2025.

[2] Gruppo consultivo tecnico dell'iniziativa globale dell'OMS sugli arbovirus. Rafforzare la preparazione e la risposta globali alle minacce di malattie arbovirali: un invito all'azione. Lancet Infect Dis. 2026;26(1):15-17.

[3] The Lancet Microbe. Superare il dilemma della diagnostica della dengue. Lancet Microbe. 2025;6(7):101190.